Bidhaa

Njia ambayo athari za mabadiliko ya wakati mmoja huchanganyika kubadilisha shughuli za enzymatic haiwezi kutabirika kwa urahisi kwa sababu athari hizi sio nyongeza kila wakati kwa njia ya mstari.Kwa hivyo, sifa za athari za mabadiliko ya wakati mmoja ya mabaki ya asidi ya amino ambayo hufunga substrate inaweza kutoa mchango mkubwa katika uelewa wa umaalum wa substrate ya vimeng'enya.Katika beta-glycosidase kutoka Spodoptera frugiperda (Sfbetagly), mabaki yote ya Q39 na E451 yanaingiliana na substrate na hii ni muhimu kwa kubainisha umaalum wa substrate.Mabadiliko maradufu ya Sfbetagly (A451E39, S451E39 na S451N39) yalitayarishwa na mutagenesis iliyoelekezwa kwenye tovuti, iliyoonyeshwa kwa bakteria na kusafishwa kwa kutumia kromatografia inayohusiana.Vimeng'enya hivi vilibainishwa kwa kutumia p-nitrophenyl beta-galactoside na p-nitrophenyl beta-fucoside kama sehemu ndogo.Uwiano wa k paka/Km kwa mutants moja na mbili za Sfbetagly zilizo na mabadiliko yanayoelekezwa kwa tovuti katika nafasi za Q39 na E451 ilitumiwa kuonyesha kwamba athari kwenye nishati ya bure ya ESdouble dagger (enzyme-transition state complex) ya mabadiliko maradufu (Gdouble). daggerxy) sio jumla ya athari zinazotokana na mabadiliko moja (Gdouble daggerx na Gdouble daggery).Tofauti hii katika daga ya Gdouble inaonyesha kuwa athari za mabadiliko moja hupishana kwa kiasi.Kwa hivyo, athari hii ya kawaida huhesabiwa mara moja tu katika Gdouble daggerxy.Data ya kioo kuhusu beta-glycosidasi inaonyesha kuwepo kwa dhamana ya hidrojeni yenye bidentate inayohusisha mabaki ya Q39 na E451 na kundi lile lile la hidroksili la substrate.Kwa hivyo, data ya hali ya joto na fuwele zinaonyesha kuwa mabaki ya Q39 na E451 yana ushawishi wa pande zote kwenye mwingiliano wao na substrate.