Bidhaa

Ili kuhesabu haswa metabolite kadhaa za 5-fluorouracil (5-FU) na nyukleotidi mbili za endogenous monofosfati, tulitengeneza mbinu ya asili kulingana na kromatografia ya kioevu-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS).Kipimo hiki kiliruhusu kubainishwa kwa: (i) uzalishaji wa ndani ya seli wa 5-fluoro-2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (5-FdUMP) kutoka 5-FU au 5-fluoro-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) . 5-FU kutoka kwa seli za utamaduni wa binadamu na wasafirishaji wa ABC.Chini ya hali zetu za majaribio, seli ziliwekwa ndani ya 5-FU au 5-FUrd.Kisha, protini za seli ziliingizwa na methanoli.Utaratibu huu ulitoa ahueni ya juu ya uchimbaji.Kwa kuongezea, ili kupima usiri wa 5-FU na 5-FdUMP kutoka kwa seli, tulifanya hesabu ya molekuli hizi kwa njia ya kitamaduni.Vyombo vya habari vilidungwa moja kwa moja (5-FU) au chini ya uchimbaji wa awamu thabiti kwa kutumia cartridge ya uchimbaji wa Oasis Wax (5-FdUMP).Utenganishaji wa uchanganuzi ulifanyika kwenye safu wima ya dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) yenye hali ya kiisokrasia kwa kutumia bafa/methanoli/maji ya ammoniamu (5/5/90, v/v) kama awamu ya rununu.Muda wa kukimbia haukuzidi dakika 6.2.Wachambuzi walikuwa ionized katika kiolesura cha electrospray chini ya hali ya ion hasi.Tuliidhinisha njia hiyo kwa anuwai ya 2.5-150 ng mL -1 kulingana na misombo.Tofauti ya ndani na kati ya majaribio ilikuwa chini ya 10% kwa siku saba.Michanganyiko yote ilikuwa thabiti katika seli au katika utamaduni wa utamaduni wakati sampuli zilihifadhiwa kwa −20 °C kwa angalau wiki mbili, na baada ya mizunguko mitatu ya kufungia.Hakuna athari ya matrix iliyozingatiwa katika media zote mbili.