Bidhaa

Upimaji mpya wa kromatografia ya kioevu ya utendaji wa juu kwa glycosyltransferasi kulingana na utokaji kwa asidi ya anthranilic na utambuzi wa fluorescence.

Uchambuzi ulitengenezwa kwa kutumia kemia ya kipekee ya kuweka lebo ya 2-aminobenzoic acid (2AA; anthranilic acid, AA) kwa ajili ya kupima shughuli za β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) na α2-6 sialyltransferase (ST-6) kwa kioevu chenye utendaji wa juu. kromatografia (HPLC) yenye ugunduzi wa umeme (Anumula KR. 2006. Maendeleo katika mbinu za derivatization ya fluorescence kwa uchanganuzi wa kromatografia ya utendakazi wa kioevu wa kabohaidreti za glycoprotein. Anal Biochem. 350:1-23).N-Acetylglucosamine (GlcNAc) na N-acetyllactosamine zilitumika kama vipokezi na uridine diphosphate (UDP)-galaktosi na cytidine monophosphate (CMP)-N-acetylneuraminic acid (NANA) kama wafadhili wa GalT-1 na ST-6, mtawalia.Bidhaa za enzymatic ziliwekwa alama kwenye situ na AA na zilitenganishwa na substrates kwenye safu wima ya TSKgel Amide 80 kwa kutumia hali ya awamu ya kawaida.Vipimo vya enzyme viliamuliwa kutoka maeneo ya kilele kwa kulinganisha na viwango vilivyotolewa kwa wakati mmoja Gal-β1-4GlcNAc na NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Linearity (wakati na mkusanyiko wa enzyme), usahihi (intra- na interassay) na reproducibility kwa majaribio ilianzishwa.Vipimo vilipatikana kuwa muhimu katika ufuatiliaji wa shughuli za kimeng'enya wakati wa kutengwa na utakaso.Majaribio yalikuwa nyeti sana na yalifanyika sawa au bora kuliko vipimo vya sukari ya mionzi ya jadi.Umbizo la upimaji pia linaweza kutumika kupima shughuli za uhawilishaji mwingine, mradi vikubali vya kabohaidreti vina kipunguzo cha kuweka lebo.Uchambuzi wa wapokeaji wa glycoprotein ulitengenezwa kwa kutumia IgG.Njia fupi ya wasifu ya HPLC ilitengenezwa kwa ajili ya kutenganisha glycans za IgG (biantennary G0, G1, G2, mono- na disialylated), ambayo iliwezesha uamuzi wa shughuli za GalT-1 na ST-6 kwa njia ya haraka.Zaidi ya hayo, mbinu hii ya kuorodhesha inafaa kuwa muhimu kwa ufuatiliaji wa mabadiliko ya IgG glycans katika mazingira ya kimatibabu.