Bidhaa

Phosphorylation ya protini inasimamia kazi mbalimbali za seli na ina jukumu muhimu katika maendeleo ya awali ya mimea.Ili kukamilisha na kupanua uchunguzi wa awali wa fosphorylation ya protini katika miche ya Arabidopsis, tulitumia mbinu mbadala inayochanganya uchimbaji wa protini chini ya hali zisizo za denaturing na kromatografia isiyoweza kusongeshwa ya metali-ion affinity chromatography (IMAC) ya phosphoproteini isiyoharibika katika dondoo zilizomalizika za Rubisco, ikifuatiwa na kitambulisho. kutumia electrophoresis ya gel ya pande mbili (2-DE) na kromatografia ya kioevu-sanjari ya spectrometry ya molekuli (LC-MS/MS).Usagaji wa trypsin wa ndani ya gel na uchanganuzi wa madoa ya jeli yaliyochaguliwa uligundua peptidi na mabaki 144 ya fosforasi, ambapo phosphopeptidi 18 tu na phosphosites 8 zilipatikana katika hifadhidata za tovuti za PhosPhat 4.0 na P3DB Arabidopsis thaliana phosphorylation.Zaidi ya nusu ya phosphoproteini zilizotambuliwa za 82 zilihusika katika kimetaboliki ya kabohaidreti, photosynthesis / kupumua au sms za kukabiliana na matatizo ya oxidative.Urutubishaji wa phosphoproteini zisizo kamili kabla ya 2-DE na LC-MS/MS inaonekana kuboresha ugunduzi wa mabaki ya threonini ya fosforasi na tyrosine ikilinganishwa na mbinu zinazotumia urutubishaji wa kiwango cha peptidi, na kupendekeza kuwa mbinu hizo mbili zinakamilishana kwa kiasi fulani katika suala la chanjo ya tovuti ya fosforasi.Kulinganisha matokeo ya miche michanga na ile iliyopatikana hapo awali kwa majani yaliyoiva ya Arabidopsis ilibainisha protini tano ambazo zina fosforasi tofauti katika tishu hizi, kuonyesha uwezo wa mbinu hii ya kuchunguza mienendo ya fosforasi ya protini wakati wa ukuaji wa mimea.