Bidhaa

Protini ya ORF45 ya virusi vya herpes inayohusishwa na sarcoma ya Kaposi (KSHV) ni protini ya tegument ya mapema ya gammaherpesvirus maalum.Masomo yetu ya awali yamefichua majukumu yake muhimu katika hatua za awali na za marehemu za maambukizi ya KSHV.Katika utafiti huu, tulichunguza mwingiliano wa ORF45 kwa kutumia jopo la kingamwili za monokloni.Kando na protini za kinase (ERK) na p90 za ribosomal S6 kinase (RSK) zilizotambuliwa hapo awali, tulipata protini zingine kadhaa zilizoidhinishwa, zikiwemo maarufu za ~38 kDa na ~130 kDa.Utambuzi wa wingi ulibaini kuwa protini ya 38-kDa ni ya virusi vya ORF33 na protini ya 130-kDa ni ya seli za USP7 (ubiquitin-specific protease 7).Tulipanga kikoa kinachofunga ORF33 kwa asidi ya amino ya carboxyl-terminal 19 (aa) iliyohifadhiwa sana ya ORF45 na kikoa kinachofunga USP7 kwa motifu ya makubaliano iliyoripotiwa katika eneo la kati la ORF45.Kwa kutumia madoa ya immunofluorescence, tuliona ujanibishaji wa ORF45 na ORF33 au USP7 chini ya ayoni za hali iliyoambukizwa na seli zilizoambukizwa KSHV.Zaidi ya hayo, tuliona uhamishaji unaotegemea ORF45 wa sehemu ya ORF33/USP7 kutoka kwa kiini hadi saitoplazimu.Tuligundua kuwa ORF45 ilisababisha ongezeko la mkusanyiko wa protini wa ORF33 ambalo lilikomeshwa ikiwa ama kikoa kinachofunga ORF33- au USP7 katika ORF45 kilifutwa.Zaidi ya hayo, kufutwa kwa terminal ya kaboksili iliyohifadhiwa ya ORF45 katika jenomu ya KSHV ilipunguza kwa kiasi kikubwa kiwango cha protini ya ORF33 katika seli zilizoambukizwa na KSHV na kukomesha uzalishaji wa virioni za kizazi.Kwa pamoja, matokeo yetu hayafichui tu vipengele vipya vya ORF45 interactome, lakini pia yanaonyesha kwamba mwingiliano kati ya protini hizi ni muhimu kwa ajili ya kujirudiarudia kwa KSHV. Herpesvirus inayohusishwa na sarcoma ya Kaposi (KSHV) ni kisababishi cha saratani kadhaa za binadamu.KSHV ORF45 ni protini yenye kazi nyingi ambayo inahitajika kwa urudufishaji wa lytic wa KSHV, lakini mbinu kamili ambazo ORF45 hufanya kazi zake muhimu haziko wazi.Masomo yetu ya awali yalifichua kuwa ORF45 pr otein zote katika seli zipo katika mchanganyiko wa uzito wa juu wa Masi.Kwa hivyo tulijaribu kubainisha mwingiliano wa ORF45 ili kutoa maarifa kuhusu majukumu yake wakati wa urudufishaji wa lytic.Kwa kutumia jopo la kingamwili za monokloni, tulichunguza mwingiliano wa ORF45 katika seli zilizoambukizwa KSHV.Tulitambua washirika wawili wapya wanaofunga wa ORF45: protini ya virusi ORF33 na protease 7 maalum ya ubiquitin (USP7).Tunaonyesha zaidi kwamba mwingiliano kati ya ORF45 na ORF33 ni muhimu kwa uzalishaji bora wa chembechembe za virusi vya KSHV, na kupendekeza kuwa mwingiliano unaolengwa wa mwingiliano huu unaweza kuwakilisha mkakati mpya wa kuzuia urudufishaji wa KSHV.